Lifrani, Awatif (2006) Etude du risque allergique à différentes protéines alimentaires Mise au point de modèle de souris allergiques à l'arachide, à l'albumine, à la caséine et à la colle de poisson. PhD thesis Physiologie de la nutrition et du comportement alimentaire, UMR Physiologie de la nutrition et du comportement alimentaire, INAPG 2006INAP0001.

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Abstract

Allergic diseases are a common cause of illness in most industrialized countries. The prevalence of allergic disorders has been increasing in the past 10-15 years. Peanut, cow's milk, eggs and fish are strong allergens frequently found in many food products (flours, wines...). Therefore Codex Alimentarius called for the mandatory and comprehensive labelling of all products prepared with these proteins. Our purpose was to establish animal models producing specific immunoglobulin IgE and IgG1 to some food proteins
(peanut, fish, albumin and casein) and developing anaphylactic reactions. First of all, we studied wine allergy in four strains of mice (C3H, CBA, DAB/2 and SJL). After the various steps of clarifying, we showed that the settling, filtration and ageing are important stages for the elimination of the proteins used for clarifying the wines. Then, we studied the cross reactivity of peanut-specific antibodies with lupine in four mouse strains. More specifically, C3H, CBA, SJL and BALB/c mice were sensitized with peanut. We showed that mice of different genetic backgrounds can be sensitized to peanut by ip injection to develop anti-peanut Abs that cross react with lupine. Cross-allergenicity may not directly correlate with the presence of cross-reactive Abs since no clinical symptoms of crossallergenicity were seen after ip challenge with lupine. Lastly, we studied the antibody responses to peanut induced in mice after several routes of sensitization in the presence of several adjuvants. We showed that peanut given in the diet with or without adjuvant did not sensitize C3H and CBA mice or cause any allergies. In conclusion, the ip immunization in the presence of alum as an adjuvant remained the fastest means and most effective way to obtain a model of allergic mice.

Table of content

1- INTRODUCTION - 9
1 -1 Définition de l'allergie - 9
1 -2 Réaction d'hypersensibilité: classification selon Gell et Coombs - 10
1 -3 Les fonctions des cellules Th1 et Th2 - 12
1 -4 Les anticorps impliqués dans l'hypersensibilité immédiate - 13
1 -4-1 Origine et structure des IgE - 13
1 -4-2 Les récepteurs aux IgE - 14
1 -4-3 Les cellules effectrices de la réaction allergique - 16
1 -4-3-1 Les cellules intervenant dans la phase précoce: mastocytes et basophiles - 16
1 -4-3-2 Les cellules intervenant dans la phase tardive de nature inflammatoire - 17
1 -4-4 Les principaux médiateurs chimiques de la réaction allergique - 18
1 -4-4-1 Les médiateurs préformés - 18
1 -4-4-2 Les médiateurs néoformés - 20
1 -4-4-3 Les cytokines - 20
1 -4-5 Les chimiokines - 21
1 -5 L'allergie alimentaire - 21
1 -5-1 Les caractéristiques de l'allergie alimentaire - 21
1 -5-2 Symptomatologie des allergies alimentaires - 22
1 -6 Différenciation entre allergie, intolérance et intoxication alimentaire - 23
1 -6-1 L'intolérance - 23
1 -6-2 Les intoxications alimentaires - 24
1 -7 Epidémiologie générale des allergies alimentaires - 24
1 -7-1 L'épidémiologie varie en fonction des paramètres étudiés - 25
1 -7-2 Les facteurs de risques - 30
1 -7-2-1 Les facteurs liés à l'individu - 30
1 -7-2-2 Les facteurs liés à l'environnement - 31
1 -7-3 Les principaux allergènes alimentaires - 32
1 -7-3-1 Les principaux allergènes d'origine végétale - 32
1 -7-3-2 Les principaux allergènes d'origine animale - 36
1 -8 Natures des allergènes alimentaires - 38
1 -8-1 Généralités - 38
1 -8-2 Structure des allergènes - 39
1 -9 Allergies croisées et réactivités croisées - 40
1 -9-1 Allergies croisées - 40
1 -9-2 Réactivité croisée - 42
1 -9-3 Réactions croisées et allergie croisée - 43
1 -10 Allergénicité - 44
1 -11 Diagnostic d'une allergie alimentaire - 46
1 -12 Traitement - 48
1 -13 Allergies alimentaires et modèles animaux - 49
2 - INTRODUCTION DU TRAVAIL - 51
62 -1 Risque allergique et vin - 52
2 -2 Risque allergique et réaction croisée arachide lupin - 53
3 - MATERIELS ET METHODES - 55
3 -1 Animaux - 55
3 -1-1 Souris - 55
3 -1-2 Lapins - 55
3 -2 Les allergènes - 55
3 -2-1 Les colles allergisantes utilisées pour la clarification du vin - 55
3 -2-1-1 Caséine - 55
3 -2-1-2 Colles de poisson - 56
3 -2-1-3 Albumine d'oeuf - 56
3 -2-2 L'arachide - 56
3 -2-3 Le lupin - 56
3 -3 Adjuvants - 56
3 -3-1 Hydroxyde d'aluminium - 56
3 -3-2 Toxine cholérique - 57
3 -3-3 Adjuvants complet et incomplet de Freund - 57
3 -3-4 Maalox - 57
3 -4 Dosage des protéines - 57
3 -5 Immunisation des modèles animaux - 57
3 -5-1 Aux colles oenologiques - 57
3 -5-1-1 Chez le lapin - 57
3 -5-1-2 Chez la souris - 58
3 -5-2 A l'arachide - 58
3 -5-2-1 Immunisation par voie intrapéritonéale - 58
3 -5-2-2 Immunisation par voie orale - 59
3 -6 Evaluation de l'allergie - 60
3 -6-1 Signes biologiques: ELISA - 60
3 -6-2 Signes cliniques: test de provocation - 61
3 -7 Préparation des échantillons de vins collés au laboratoire - 62
3 -7-1 Caractéristiques des vins sélectionnés - 62
3 -7-2 Collage expérimental au laboratoire - 62
3 -7-2-1 Collage à la caséine - 62
3 -7-2-2 Collage aux Ichtyocolles - 62
3 -7-2-3 Collage à l'albumine - 63
3 -8 Préparation des échantillons de vins commercialisés - 64
3 -8-1 Vin de Bordeaux collé à l'albumine avec lysozyme (AaL) - 64
3 -8-2 Vins collés à la caséine (K) - 65
3 -8-3 Vins collés à la colle de poisson flocon (IF) - 65
3 -9 Allergénicité des produits de collage / tests de provocation - 65
3 -9-1 Les vins collés au laboratoire - 65
3 -9-2 Les vins commercialisés - 65
3 -10 Caractérisation immunochimique des antigènes/ allergènes - 66
3 -10-1 Analyses électrophorétiques des différentes colles - 66
3 -10-2 Révélation des allergènes avec les sérums: immuno-empreinte - 66
73 -10-3 Analyse électrophorétique des protéines contenues dans l'extrait d'arachide et dans la farine de lupin - 66
3 -11 Statistique - 67
4 - RESULTATS ET DISCUSSIONS - 68
4 -1 Mise au point d'un modèle de souris allergiques aux différentes colles oenologiques.
Recherche de traces de ces colles dans le vin - 68
4 -1-1 Résultats de l'analyse par électrophorèse des protéines contenues dans les différentes colles pures - 68
4 -1-2 Résultats de l'immuno-empreinte - 68
4 -1-3 La mise au point de modèles animaux sensibles à l'albumine, à la colle de poisson et à la caséine - 70
4 -1-3-1 Modèles lapins pour la production d'IgGt spécifiques anti-colles - 70
4 -1-3-2 Modèles souris - 70
4 -1-4 Effets des différents échantillons de vins collés au laboratoire sur les C3H et DBA/2
sensibilisées aux différentes colles - 74
4 -1-5 Effets des différents échantillons de vins commercialisés sur les C3H et DBA/2 sensibilisées avec les colles - 77
4 -1-6 Discussion - 78
4 -2 Mise au point d'un modèle de souris allergique à l'arachide pour étudier les réactions allergiques croisées entre l'arachide et le lupin - 84
4 -2-1 Contenu en protéines de la préparation d'arachide - 84
4 -2-2 Contenu en protéines de la farine du lupin - 84
4 -2-3 L'analyse électrophorétique de la farine de lupin et de l'extrait d'arachide - 84
4 -2-4 Modèle de souris sensibilisés à l'arachide - 84
4 -2-4-1 Sensibilisation des différentes souches de souris à l'arachide par voie intra-péritonéale.
- 84
4 -2-5 Réactions croisées in vitro anti-lupin des souris immunisées à l'arachide - 87
4 -2-6 Discussions - 88
4 -3 Effets, sur la réponse immunitaire, de la voie d'administration, de la souche de souris et de la forme sous laquelle l'antigène est administré - 93
4 -3-1 Introduction - 93
4 -3-2 Sensibilisation des souris par voie i.p - 93
4 -3-3 Sensibilisation des souris par intubation gastrique - 95
4 -3-4 Sensibilisation des souris par voie buccale - 96
4 -3-4-1 Consommation d'extrait d'arachide en absence et en présence d'alun (ip) - 96
4 -3-4-2 Consommation d'arachide sous forme de graine entière - 96
4 -3-5 Discussion - 97
5 - CONCLUSION - 104
6 - PERSPECTIVES - 106
7 - BIBLIOGRAPHIE - 107
8 - SOURCES ELECTRONIQUE - 117
9 - ABREVIATIONS - 118
10 - LEXIQUE - 119
811 - PUBLICATION - 123

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